大阳城携手汉诺生物、Genovis AB,开发亚基水平上糖蛋白糖链位点和结构分析新方案
2023-08-17



近日,大阳城集团携手蛋白质糖基化位点及结构特异分析测试服务提供商汉诺生物、SmartEnzymes™系列酶产品制造商Genovis AB,开发推广亚基水平上糖蛋白糖链位点和结构分析新方案,进一步赋能临床医学诊断、生物医药工艺及分析、糖蛋白质组学、糖科学糖工程等相关应用及研究领域。


抗体分析的不同方法



糖基化是蛋白质上一种复杂的异质修饰,在修饰位点上具有宏观和微观不均一性;在糖链结构上具有序列结构、链接结构、异头异构及立体构型等多个维度。


这些修饰糖链以位点和结构特异的方式调控蛋白质的结构和功能(如药物安全性、稳定性和有效性)。修饰糖链位点尤其是结构分析是一个巨大的挑战。


当使用质谱分析方法时,通过酶切底物(简化底物)减少聚糖的异质性,在亚基水平上进行表征,是糖链位点和结构特异分析有效的方式。




a~d单糖序列结构的准确鉴定和明确区分




相比较目前常见的完整质量和肽图谱等分析方法,亚基水平上的分析方法具有如下优势:

优势

1.数据的处理更快速、实验操作更简单、获得的信息更完整;

2.对高通量、自动化的应用场景更友好,并支持肽图分析,例如克隆筛选、工艺开发和验证以及稳定性研究;

3.可以通过使用SmartEnzymes系列酶将抗体分解成更小的片段,提高分辨率、提升修饰鉴定水平,不仅能够更好地识别修饰,而且能够将它们定位到蛋白质上的单个结构域;

4.糖链分析配备有完备的常见物种结构特异糖链数据库,基于串级质谱位点决定性碎片离子对糖基化位点进行明确定位,基于糖链结构诊断性碎片离子对序列和链接异构体进行明确区分,得到氨基酸序列、糖基化位点、糖链单糖组成,尤其是序列结构以及链接结构的全面信息;

5.适用于受控环境中的批次放行方法。



FabRICATOR酶消化IgG过程演示



FabRICATOR酶消化IgG后的亚基分析


案例分析


有科学家将FabRICATOR酶(IdeS)用于阿达木单抗(人IgG1)的亚基分析表征,并将数据与同一样品的完整质量分析进行比较。
首先,消化抗体成更小的亚基,即FabRICATOR酶消化和还原抗体后生成Fc/2, LC和Fd',这些亚基在10分钟内被反相LC很好地分离。这种亚基的大小(25kDa)对于高分辨率质谱来说是绝对完美的,这可以准确地确定单同位素质量,更好地识别潜在的蛋白质修饰。
此外,由于亚基可以被分开,任何被识别的修饰都可以定位到特定的域(而对应的完整蛋白质分子水平上的分析则做不到这一点),这对于深度表征非常重要。
因此,我们只需短时间的酶消化及LC分离,就可以实现亚基分子水平上的聚糖分析,而不需要太多额外的工作,这就是亚基分析的真正力量。 


FabRICATOR消解后得到约25kDa亚基的高分辨色谱数据



亚基水平上:特定亚基上的修饰信息



同时获得的质量测定和PTMs分析数据


大阳城集团积极拓展与国内外知名品牌的合作,不断导入专业性品牌,以严格质量标准筛选各类产品,形成完善的产品集成供应体系,为广大科研工作者提供更优质的产品与服务。